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        PDA培養基的制作方法

        發布日期: 2013-01-07   來源:中國食用菌商務網

            馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基是使用最頻繁的培養基,簡稱PDA,主要用于真菌的分離和培養,有時也用于植物病原細菌的培養。

            PDA培養基(馬鈴薯葡萄糖培養基)配方:去皮馬鈴薯200g 葡萄糖20g瓊脂15—20g蒸餾水1000ml 自然pH。在PDA培養基配方中也可用蔗糖代替葡萄糖,這樣配制的培養基也稱為PSA培養基。
          (1)稱量。稱量去皮馬鈴薯200g,葡萄糖20g,瓊脂15--20g。提示:瓊脂加入的量取決于瓊脂的質量,質量好的15g就夠了,質量差的應適當增加。另外,在夏天氣溫較高時,適當增加用量。
          (2)將馬鈴薯切成小塊,放入鍋中,加水1000ml,煮沸20~30min。用紗布濾去馬鈴薯殘渣。
          (3)將馬鈴薯濾液放回鍋中,加入瓊脂,加熱熔化。
          提示:在瓊脂熔化的過程中,需要用玻璃棒不斷攪拌,并控制火力不要使培養基溢出或燒焦。
          (4)加入葡萄糖。葡萄糖溶解后,加入適量的水以補充加熱過程中損失的水分,定容至1000ml。
          提示:通常在制作培養基的鍋內用紅藍鉛筆標記出不同體積的刻度,如1000ml、2000ml等,在定容時直接將水加至已標記的刻度即可。
          (5)分裝。根據不同的實驗目的,可將配制的培養基分裝于試管內或三角瓶內。分裝試管,其量為管高的1/5,滅菌后制成斜面。分裝三角瓶的容量以不超過三角瓶容積之一半為宜。
          (6)加塞。在管口或瓶口塞上棉塞。棉塞要用未脫脂的經彈松的棉花,棉塞可過濾空氣,防止雜菌侵入并可減緩培養基水分的蒸發,故在植物病理學研究工作中普遍使用。
          正確的棉塞是形狀、大小、松緊與管口或瓶口完全適合,過緊時妨礙空氣流通,操作不便;過松則達不到濾菌的目的,且棉塞過小往往容易掉進試管內。正確的棉塞頭較大,約有1/3在外,2/3在試管內。分裝過程中注意不要使培養基沾染在管(瓶)口上以免浸濕棉塞,引起污染。如不使用棉塞也可用橡皮塞或特制的金屬、塑料試管帽,為讓空氣可以自由進出,橡皮塞不要過緊,滅菌前應夾一紗線在管口。
          (7)包扎。加塞后,將試管用線繩捆好,再在棉塞外包一層牛皮紙,以防止滅菌時冷凝水潤濕棉塞,其外再用一道線繩扎好。用記號筆注明培養基名稱、配制日期、組別、制作人等。
          (8)滅菌。將上述培養基以0.103MPa,121℃,高壓蒸氣滅菌20~30min??梢杂眉矣酶邏哄伾掀鬁缇?小時。
          (9)擱置斜面。將滅菌的試管培養基冷至50℃左右(以防斜面上冷凝水太多),將試管口端擱在玻棒或其他合適高度的器具上,擱置的斜面長度以不超過試管總長的一半為宜。
          培養基經滅菌后,必須放在37C溫箱培養24h,或常溫下放置幾天后無菌生長者方可使用。PDA培養基一般不需要調pH。對于要調節pH的培養基,一般用pH試紙測定其pH。如果培養基偏酸或偏堿時,可用lmol/LNaOH或lmol/LHCL溶液進行調節。調節時應逐滴加入NaOH或HCl溶液,防止局部過酸或過堿破壞培養基成分。
          提示:pH不要調過頭,以避免回調而影響培養墓內各離子的濃度。配制低pH的瓊脂培養基時,若預先調好pH并在高壓蒸汽下滅菌,則瓊脂因水解不能凝固。因此,應將培養基的成分和瓊脂分開滅菌后再混合,或在中性pH條件下滅菌,再調整pH。

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