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        北蟲草液體菌種制作方法

        發布日期: 2014-01-14   來源:中國食用菌商務網

            一、培養基配方
            配方:玉米粉1%、葡萄糖2%、蛋白胨1%、酵母粉0.5%、磷酸二氫鉀0.1%、水95.35%、硫酸鎂0.05%、維生素B1 10mg、PH值調至6.5左右。
            二、制作培養方法
            1. 制作一級搖瓶種:將這些原料溶于水后裝在500毫升三角瓶中,每個三角瓶裝量200毫升,放入玻璃珠3粒左右,塞緊棉塞,然后用4層紗布罩住棉塞、瓶口扎緊,放在高壓滅菌鍋內進行消毒,待壓力表上升至0.5kg/cm2壓力時,即放凈冷氣待指針降至0后,再關掉放氣閥門,待溫度表指針逐漸上升至1.1kg/cm2后就開始保溫30分鐘后,慢慢下降指針至0,然后開蓋冷卻至常溫,再移入接種箱或超凈工作臺等待接種。
            2. 接種方法:先把滅菌后的北蟲草液體菌種培養基移放在超凈工作臺上,并把北蟲草母種和接種勾、酒精燈、酒精棉球等接種物品也放在超凈工作臺上,工作服掛在接種室消毒。然后在接種室點燃煙霧劑(用臭氧消毒器更好),立即關閉所有門窗密閉消毒同時打開紫外線燈。待40min后,將煙霧放凈,關閉紫外線燈,接種人員就可進行接種。接種的方法是穿好工作服,打開超凈工作臺風機,點燃酒精燈,左手拿著母種試管對準火焰口,右手拿著鐵勾在酒精燈火焰消毒3-5秒種后立即伸進母種試管內把菌種分成5-7段,再用左手迅速將紗布瓶蓋打開,右手立即把一段菌塊勾入瓶內(每瓶接入5-6片0.5平方厘米大小菌種)速將瓶蓋按原樣蓋緊。
            當北蟲草菌種接好后,移入22-24℃恒溫培養室,搖床震蕩發菌培養。搖床轉速140r/min,經過4-6天的發菌培養,經檢查北蟲草菌液的顏色開始清亮、菌球密集,瓶口聞有很濃的北蟲草氣味,可判斷為菌種優良。如發現發菌瓶內濃度低、氣味臭,并有五顏六色的菌液,就是有雜菌污染,堅決不能用。
            3. 制作二級搖瓶:培養基同一級,用5000ml三角瓶裝量2000ml北蟲草液體菌種,滅菌冷卻后把一級搖瓶種按10%無菌操作接入大搖瓶,22-24℃,140r/min震蕩培養72小時后,菌球大小均勻、密度80%以上,菌液清亮,氣味清香、無污染的即為合格菌種。由于5000ml大搖瓶體積較大,用手提高壓鍋放不下,用大鍋又太浪費,為解決大搖瓶滅菌問題,花山食用菌研究所研制了一款100升立式電加熱自控高壓滅菌鍋,一次可滅4個5000的大搖瓶,同時,研制了一次可搖5-7瓶5000ml大三角瓶的搖床,輕便、無噪音、耗能低。
            4. 菌種稀釋:發好的蟲草液體菌種接種前需要稀釋以擴大接種規模。稀釋倍數依據接種的盤數按5-8倍稀釋。用稀釋罐稀釋時,按液體罐空消、實消操作規程:
            (A)發酵罐空消
            發酵罐空消(內膽、過濾器、管線的消毒)是對發酵罐進行設備消毒滅菌的過程,對于放置一周不用的發酵罐或者是因為停電使空壓機(打氣泵)停止運轉的發酵罐都需要進行發酵罐的空消操作,具體的操作方法:
            (1)關閉發酵罐,除夾套排氣門外的所有閥門,擰緊發酵罐罐口蓋子。
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