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        黑木耳母种培养基配制后的接种与培养

        发布日期: 2019-12-04   来源:中国食用菌商务网

            1.固体菌种生产:
            固体菌种是菌丝体生长在固体培养基中而形成的固体形态菌种。 试管母种(1级种) 菌种通常被分为3级。1级种也叫母种或试管种,可用组织分离法或孢子分离法获得母种。2级种也叫原种,是利用母种的菌丝体接入木屑培养基中所产生的菌种。3级种也叫栽培种,是利用原种再扩繁一次所产生的菌种,它直接用于生产,因此也叫生产种。 经过母种—原种—栽培种的不断扩大繁殖后,菌丝体的数量越来越多,越来越强壮,利用这样的菌丝体投入生产就可以生长出优良的子实体。
            母种培养基的配制:
            (1)常用配方:马铃薯200克、白糖20克、琼脂20克、水1000毫升。为了强化营养,有条件的生产者可在上述培养基中添加蛋白胨3.0克、磷酸二氢钾3.0克、硫酸镁1.5克。
            (2)配制方法:首先把马铃薯削皮、切片、水煮,八分熟后取其汁液,再将汁液小火加热,放入琼脂、白糖。溶化后把培养基装入规格为18毫米×180毫米的试管中,装入高度为管长的1/4或1/5为适宜。分装后试管塞紧棉塞,每7支捆成1捆,用牛皮纸包扎,准备灭菌。
            (3)培养基灭菌:用手提式高压蒸汽灭菌锅或家用高压锅灭菌,在0.12兆帕压力下(锅内温度121℃)灭菌40分钟。待温度降至60℃时取出摆斜面,斜面长度最好占管长的2/3左右比较合适。
            2.菌种分离与扩大培养:
            菌种分离方法有孢子分离法、组织分离法、耳木分离法。孢子分离法是选用当年生无杂菌污染的鲜耳片,以黑、厚、大为佳,经无菌水冲洗几次,用丝线将耳片腹面向下吊挂,另一端吊挂在装有培养基的三角瓶口部,加棉塞封口,在25~28℃温箱中接收孢子并培养成菌丝体。组织分离法是选用优质耳片,表面用75%酒精棉球擦拭2~3遍,用酒精棉包住耳片约2分钟,剪取远离耳基没有筋的部位约0.2平方厘米。在无菌条件下,接入试管斜面培养基上,经28℃左右的温度培养长出菌丝体。
            耳木分离法是从黑木耳的段木中分离菌丝体获得菌种的方法。切取火柴头大小的木块,经过消毒,在无菌条件下接入试管斜面,经25~28℃的培养就能长出菌丝体。在菌种分离时,要在接种箱中或接种室超净工作台上进行无菌操作,防止杂菌污染。分离几天后在试管斜面上就会长出白色的绒毛状黑木耳菌丝。经过10天左右的培养,菌丝可长满斜面,这就是母种。分离成功的试管母种,还可以在试管斜面培养基上扩大繁殖1~3次,这个过程称为转管或扩管,也叫传代。一般1支母种可转30~40支母种,从而满足生产上的需要。
            3.原种与栽培种生产:原种及栽培种的培养基是通用的,其种类很多,下面仅介绍常用的木屑培养基:
            (1)培养基配方:培养基常用配方为阔叶树木屑78%,麦麸或米糠20%,蔗糖1%,石膏1%。
            (2)配制方法:先把木屑过筛,将木屑、麦麸或米糠、石膏混合均匀,再用熔化的糖水拌料,使培养料的含水量达到60%左右。测定方法是用手紧握培养料,指缝间稍有水印而不成滴。
            (3)培养基装瓶与装袋:一般用瓶子生产原种。培养基配好后,即可装入制种瓶中,装至瓶肩,料面压平。培养料在瓶中要求上紧下松,中间用木锥扎1个孔。瓶口内外要擦净,广口瓶用丙烯膜或乙烯膜及胶圈封口(丙烯膜适合高压蒸汽灭菌,乙烯膜适合常压蒸汽灭菌),小口瓶用棉塞封口。 一般用塑料袋生产栽培种,聚乙烯袋适合常压蒸汽灭菌,聚丙烯袋适合高压蒸汽灭菌。袋的大小以33厘米×17厘米×0.005厘米较为适合。装袋时要保证松紧适当,装袋后套上套环,插入接种棒,用棉塞塞紧或封专用塑料盖。装袋时对料袋要轻拿轻放,防止沙?;蛟游锝唐埔鹞廴?。
            (4)培养基灭菌:原种及栽培种培养基装瓶装袋后再装入铁筐或塑料筐内准备灭菌。灭菌方法有常压蒸汽灭菌和高压蒸汽灭菌两种。采用常压蒸汽灭菌时,锅内温度达到100℃后要保持8小时以上。采用高压蒸汽灭菌时,锅内在0.15兆帕压力下(锅内温度127℃)灭菌1.5小时。 常压蒸汽灭菌锅可自行修建,高压蒸汽灭菌锅或灭菌柜一定要从正规厂家购买,以保证安全生产。
            4.接种与培养:
            (1)接种:经过灭菌后的瓶或袋,待料温降到30℃以下后,搬入接种箱、接种帐或接种室进行接种。接种前,将接种器具、物品搬入接种场所。这些器具和物品主要有接种匙、镊子、酒精灯、酒精棉球、菌种、待接种的料袋。物品放好后,再用气雾消毒剂进行熏蒸消毒,40分钟后方可使用。 原种是由母种扩接到原种培养基上而得到的菌种,栽培种是由原种扩接到栽培种培养基上而得到的菌种。用原种接栽培种时首先要先拔出料袋内的接种棒再进行接种。
            (2)培养:培养场所在使用前也要用气雾消毒剂进行熏蒸消毒。温度控制在25~28℃,空间适宜的相对湿度为60%左右,要暗光养菌并经常通风换气,培养过程中要经常检查有无杂菌污染。菌种长好后放在低温、干燥、清洁处避光保藏,准备使用。另外,栽培种不宜再做菌种扩大繁殖。
            5.无菌接种操作程序:首先将接种箱、接种室收拾干净,放入培养基、菌种、接种用具。用气雾消毒粉进行熏蒸消毒,每立方米空间用量1包(5克),置于容器中点燃,保持40分钟以上。用75%酒精棉擦抹双手。点燃酒精灯,接种工具灼烧灭菌后开始接种。接种时一定要保持无菌操作,培养基接种后移到培养室进行培养。(来源:山东泽海菌业) 
         
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