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        黑木耳母種培養基配制后的接種與培養

        發布日期: 2019-12-04   來源:中國食用菌商務網

            1.固體菌種生產:
            固體菌種是菌絲體生長在固體培養基中而形成的固體形態菌種。 試管母種(1級種) 菌種通常被分為3級。1級種也叫母種或試管種,可用組織分離法或孢子分離法獲得母種。2級種也叫原種,是利用母種的菌絲體接入木屑培養基中所產生的菌種。3級種也叫栽培種,是利用原種再擴繁一次所產生的菌種,它直接用于生產,因此也叫生產種。 經過母種—原種—栽培種的不斷擴大繁殖后,菌絲體的數量越來越多,越來越強壯,利用這樣的菌絲體投入生產就可以生長出優良的子實體。
            母種培養基的配制:
            (1)常用配方:馬鈴薯200克、白糖20克、瓊脂20克、水1000毫升。為了強化營養,有條件的生產者可在上述培養基中添加蛋白胨3.0克、磷酸二氫鉀3.0克、硫酸鎂1.5克。
            (2)配制方法:首先把馬鈴薯削皮、切片、水煮,八分熟后取其汁液,再將汁液小火加熱,放入瓊脂、白糖。溶化后把培養基裝入規格為18毫米×180毫米的試管中,裝入高度為管長的1/4或1/5為適宜。分裝后試管塞緊棉塞,每7支捆成1捆,用牛皮紙包扎,準備滅菌。
            (3)培養基滅菌:用手提式高壓蒸汽滅菌鍋或家用高壓鍋滅菌,在0.12兆帕壓力下(鍋內溫度121℃)滅菌40分鐘。待溫度降至60℃時取出擺斜面,斜面長度最好占管長的2/3左右比較合適。
            2.菌種分離與擴大培養:
            菌種分離方法有孢子分離法、組織分離法、耳木分離法。孢子分離法是選用當年生無雜菌污染的鮮耳片,以黑、厚、大為佳,經無菌水沖洗幾次,用絲線將耳片腹面向下吊掛,另一端吊掛在裝有培養基的三角瓶口部,加棉塞封口,在25~28℃溫箱中接收孢子并培養成菌絲體。組織分離法是選用優質耳片,表面用75%酒精棉球擦拭2~3遍,用酒精棉包住耳片約2分鐘,剪取遠離耳基沒有筋的部位約0.2平方厘米。在無菌條件下,接入試管斜面培養基上,經28℃左右的溫度培養長出菌絲體。
            耳木分離法是從黑木耳的段木中分離菌絲體獲得菌種的方法。切取火柴頭大小的木塊,經過消毒,在無菌條件下接入試管斜面,經25~28℃的培養就能長出菌絲體。在菌種分離時,要在接種箱中或接種室超凈工作臺上進行無菌操作,防止雜菌污染。分離幾天后在試管斜面上就會長出白色的絨毛狀黑木耳菌絲。經過10天左右的培養,菌絲可長滿斜面,這就是母種。分離成功的試管母種,還可以在試管斜面培養基上擴大繁殖1~3次,這個過程稱為轉管或擴管,也叫傳代。一般1支母種可轉30~40支母種,從而滿足生產上的需要。
            3.原種與栽培種生產:原種及栽培種的培養基是通用的,其種類很多,下面僅介紹常用的木屑培養基:
            (1)培養基配方:培養基常用配方為闊葉樹木屑78%,麥麩或米糠20%,蔗糖1%,石膏1%。
            (2)配制方法:先把木屑過篩,將木屑、麥麩或米糠、石膏混合均勻,再用熔化的糖水拌料,使培養料的含水量達到60%左右。測定方法是用手緊握培養料,指縫間稍有水印而不成滴。
            (3)培養基裝瓶與裝袋:一般用瓶子生產原種。培養基配好后,即可裝入制種瓶中,裝至瓶肩,料面壓平。培養料在瓶中要求上緊下松,中間用木錐扎1個孔。瓶口內外要擦凈,廣口瓶用丙烯膜或乙烯膜及膠圈封口(丙烯膜適合高壓蒸汽滅菌,乙烯膜適合常壓蒸汽滅菌),小口瓶用棉塞封口。 一般用塑料袋生產栽培種,聚乙烯袋適合常壓蒸汽滅菌,聚丙烯袋適合高壓蒸汽滅菌。袋的大小以33厘米×17厘米×0.005厘米較為適合。裝袋時要保證松緊適當,裝袋后套上套環,插入接種棒,用棉塞塞緊或封專用塑料蓋。裝袋時對料袋要輕拿輕放,防止沙?;螂s物將袋刺破引起污染。
            (4)培養基滅菌:原種及栽培種培養基裝瓶裝袋后再裝入鐵筐或塑料筐內準備滅菌。滅菌方法有常壓蒸汽滅菌和高壓蒸汽滅菌兩種。采用常壓蒸汽滅菌時,鍋內溫度達到100℃后要保持8小時以上。采用高壓蒸汽滅菌時,鍋內在0.15兆帕壓力下(鍋內溫度127℃)滅菌1.5小時。 常壓蒸汽滅菌鍋可自行修建,高壓蒸汽滅菌鍋或滅菌柜一定要從正規廠家購買,以保證安全生產。
            4.接種與培養:
            (1)接種:經過滅菌后的瓶或袋,待料溫降到30℃以下后,搬入接種箱、接種帳或接種室進行接種。接種前,將接種器具、物品搬入接種場所。這些器具和物品主要有接種匙、鑷子、酒精燈、酒精棉球、菌種、待接種的料袋。物品放好后,再用氣霧消毒劑進行熏蒸消毒,40分鐘后方可使用。 原種是由母種擴接到原種培養基上而得到的菌種,栽培種是由原種擴接到栽培種培養基上而得到的菌種。用原種接栽培種時首先要先拔出料袋內的接種棒再進行接種。
            (2)培養:培養場所在使用前也要用氣霧消毒劑進行熏蒸消毒。溫度控制在25~28℃,空間適宜的相對濕度為60%左右,要暗光養菌并經常通風換氣,培養過程中要經常檢查有無雜菌污染。菌種長好后放在低溫、干燥、清潔處避光保藏,準備使用。另外,栽培種不宜再做菌種擴大繁殖。
            5.無菌接種操作程序:首先將接種箱、接種室收拾干凈,放入培養基、菌種、接種用具。用氣霧消毒粉進行熏蒸消毒,每立方米空間用量1包(5克),置于容器中點燃,保持40分鐘以上。用75%酒精棉擦抹雙手。點燃酒精燈,接種工具灼燒滅菌后開始接種。接種時一定要保持無菌操作,培養基接種后移到培養室進行培養。(來源:山東澤海菌業) 
         
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