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          繡球菌栽培:母種制備工藝

          發布時間:2020-07-15

            來源:中國食用菌商務網

              母種是指經規范方法選育后而獲得的,具有結實性的菌絲體純培養物及其繼代培養物,以玻璃試管為培養容器和使用單位,通常又稱為一級種或者試管種。
              關于繡球菌原始母種的來源,在有條件的地方可以從子實體上自行提取,但是由于制作過程要求嚴謹,難度較高,所以一般的生產單位都是從國家認可的研究單位購買而來的。買回后直接進行母種的擴繁就可以,首先來看一下母種培養基的制作。
              母種培養基的制作
              制作母種培養基時所采用的配方為:復合糖蛋白30克,蛋白胨1克,大豆粉1克,KH2PO4(磷酸二氫鉀)1克,瓊脂粉20克,水1000毫升。上面的材料都準備好以后,就可以制作了。
              將準備好的培養基配方依次倒入鍋內,瓊脂粉先不要放入,邊加熱邊攪拌,等到沸騰的時候再加入瓊脂粉,并不斷攪拌,直到瓊脂粉完全融化,然后再將煮好的培養基倒入塑料杯內,這時需要注意的是,如果體積不足1000毫升還要加水補足。
              試管分裝
              整理好以后,要趁熱將培養基倒入固定在鐵架臺上的漏斗內,用量筒量取10毫升的蒸餾水,倒入一支空試管內,做分裝試管的對照。將漏斗軟管下端的玻璃管插入試管口約3厘米深處,用右手捏緊橡膠軟管的止水夾,使培養基緩緩流入空試管內,直到液面與蒸餾水的液面持平為止,然后松開止水夾,讓培養基停止流入,并將試管下移離開軟管。接下來,依次重復,直到將培養基全部分裝到試管內,分裝試管時需要注意的是,動作要迅速連貫,以防止培養基在漏斗內凝固。分裝完成后,每支試管都要用硅膠塞住。接下來還要將試管進行扎捆。
              試管包扎
              一般情況下,每7支試管作為一扎,先用橡皮筋將試管下端扎緊,再用牛皮紙將試管口處進行包裹,并用橡皮筋進行困扎。下面就要進行滅菌的工作了。
              培養基滅菌
              將包扎好的培養基試管垂直放入滅菌框內,再將滅菌框放入滅菌鍋內,在120攝氏度的高溫下進行滅菌30分鐘。待滅菌鍋溫度降至60攝氏度左右時,要及時取出試管,并將它們擺放成斜面。
              擺放斜面
              斜面的長度以試管長度的1/2—2/3為好,當試管內培養基完全凝固后才可以將試管收起,制作好的母種培養基應放置在陰涼、通風、干燥處保存,留作備用。上面的工作都完成以后,還要進行母種的接種工作。
              母種接種
              轉管過程
              母種接種是將菌種接入試管斜面的過程。在完全無菌的接種箱、接種室或超凈工作臺上進行。首先,將制備好的母種培養基,待轉母種,酒精燈,打火機,接種鉤,酒精棉球等放到超凈工作臺上,打開紫外燈,在低速通風的環境下滅菌30分鐘,然后關閉紫外燈,并將風速調節為中速,通風5分鐘后再打開日光燈。
              接種時,先點燃酒精燈,用酒精棉球將雙手進行擦拭消毒,消毒完成后,用左手握住母種和斜面培養基試管各一支,注意,斜面要向上,同時還要使它們處于水平位置。右手拿住接種鉤,在火焰外焰上反復灼燒,直到接種鉤最前端變為紅色為止,接下來,拔掉兩個試管的膠塞,將灼燒過的接種鉤伸入母種試管內,將母種表層菌絲連同培養基挖取少許,送入待接試管內斜面的中間部位,抽出接種鉤后,要灼燒管口,然后再塞上膠塞。當所有的試管全部轉接完成后,就可以進行培養了。
              培養
              首先要將試管重新捆扎,并記錄好接種時間,將接種后的試管放入25攝氏度的恒溫培養箱中,培養15天左右菌絲即可長滿。
              菌種質量的檢查
              正常的母種菌絲體潔白、健壯、濃密、均勻、絨毛狀、生長整齊、菌落舒展、邊緣整齊,無色素,無肉眼可看到的污染物。均勻分布在試管斜壁上。反之,菌絲體潔白、暗淡、稀疏、生長不整齊,菌落緊皺,邊緣不整齊,有黃色分泌、培養基內有色斑沉淀,有肉眼可觀察到的污染物,試管有破裂等均為劣質種。

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